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產(chǎn)品名稱:苛養(yǎng)木桿菌PCR檢測試劑盒品牌
英文名稱:Xylella fastidiosaPCR
規(guī)格:詳見說明書
類別:PCR檢測試劑盒
運(yùn)輸:低溫、避光、快遞免費(fèi)送貨上門。
用途:生化實驗,合成實驗等試驗。
運(yùn)輸及保存:低溫運(yùn)輸,-20℃保存, 保存期限為 6 個月。
自備試劑:樣品 RNA。?
性能指標(biāo):點(diǎn)擊了解更多PCR檢測試劑盒。
.試劑盒檢測特異性為00%
2. 檢測試劑盒重現(xiàn)性為00%
3. 靈敏度可達(dá)到03/ml
4. 有效期為6個月
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使用方法:
一、樣品 RNA 的制備
、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意:可以選用本公司的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二:RT(逆轉(zhuǎn)錄)反應(yīng)合成 cDNA
. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系(20 μL 體系)
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴(yán)格按順序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),
反應(yīng)終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應(yīng)。
5. 70℃保溫 0 分鐘以終止反應(yīng),然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用,丌需要純化。
注意事項:
①加入試劑的順序應(yīng)*,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 5-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至0kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.~umol或0~00pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。?,5-二氯-3-戊酮 3592-25-4 200mL Ethylene Glycol -20℃保存
2,5-二甲氧* 3600-86-0 200mL HRP Stablizing Solution -20℃保存
2-溴-6-氟苯甲 360575-28-6 30µL β-Actin Mouse MAb -20℃保存
5-氯吡-2-羧 36070-80- 30µL α-Actin Mouse MAb -20℃保存
N-乙基-4-哌啶酮 362-8-8 30µL β-Tubulin Mouse MAb -20℃保存
5-溴-2-基酚 3638-76-8 30µL α-Tubulin Mouse MAb -20℃保存
2-氟-3-溴啶 3678-05-9 30µL GAPDH Mouse MAb -20℃保存
異丁酰 369-7-8 30µL Plant Actin Mouse MAb -20℃保存
2-氯-5-基并噻唑 3622-3-9 30µL Histone 3. Mouse MAb -20℃保存
2-氯-4-基并噻唑 3622-32-0 20µL COX IV Rabbit MAb -20℃保存
-溴-3,3-二甲氧基丙烷 36255-44-4 00µL Goat Anti-Mouse IgG(H+L),AP Conjugate -20℃保存
2',3'-異丙叉腺苷 362-75-4 00µL Goat Anti-Rabbit IgG(Fc),AP Conjugate -20℃保存
5-乙酰基-2-基啶 36357-38-7 00µL Goat Anti-Human IgG(H+L),AP -20℃保存
3,4-二基乙酮 634430 00µL Goat Anti-Rat IgG(H+L),AP -20℃保存
環(huán)戊基甲醇 3637-6-4 60µL Donkey Anti-Goat IgG,AP Conjugate -20℃保存
苛養(yǎng)木桿菌PCR檢測試劑盒品牌,4-二氧六環(huán) 規(guī)格: 0.2ml Rat beta cellulin,BTC
純水 規(guī)格: 0.ml Rat β-Thromboglobulin,β-TG
氧化銨 規(guī)格: 0.2ml Rat Gamma-aminobutyric acid,GABA
溴水 規(guī)格: 0.ml Rat Interferon γ ,IFN-γ
過氧化 規(guī)格: 0.ml Rat interferon-inducible protein 6,IFI6/p6
銅箔 規(guī)格: 0.ml Rat Orexin A
鍺粉 規(guī)格: 0.ml Rat Interleukin ,IL-
氧化鍺 規(guī)格: 0.2ml Rat Interleukin 0,IL-0
金海棉 規(guī)格: 0.ml Rat Interleukin ,IL-
銥海棉 規(guī)格: 0.ml Rat Interleukin 2,IL-2/P40
洗石棉 規(guī)格: 0.ml Rat Interleukin 2,IL-2/P70
燒堿石棉 規(guī)格: 0.ml Rat Interleukin 3,IL-3
氧化鉿 規(guī)格: 0.2ml Rat Interleukin 5,IL-5
銦粒 規(guī)格: .0ml Rat Interleukin 6,IL-6
銦 規(guī)格: .0ml Rat Interleukin 7,IL-7
企業(yè)信息
ENTERPRISE INFORMATION上海谷研實業(yè)有限公司
3004918891發(fā)送信件產(chǎn)品分類
CLASSIFICATION聯(lián)系方式
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