常見問題:點擊了解更多熒光-PCR法。
一.沒有擴增產物
.循環溫度:變性溫度、退火溫度
2.引物設計
3.DNA聚合酶活性
4.抑制性成份(蛋白酶、核酸酶、其它抑制聚合 酶活性的成份)
5、DNA樣品
二.非特異產物及電泳呈涂布狀
.Mg2 濃度
2.調整引物、模板、聚合酶的用量
3.適當減少循環數
4.適當提高退火溫度,縮短退火或延伸時間?
產品名稱 | EB病毒(EBV)核酸檢測試劑盒 |
規格 | 48T/盒 |
分類 | 熒光-PCR法 |
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使用及效果:
PCR反應特點
() 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區,其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產物的生成量是以指數方式增加的,能將皮克(pg=0-2g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=0-6g)水平。能從00萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發、細胞、活PCR技術概論。?N-叔丁氧羰基-去甲托品酮 500mL EBC- Lysis Buffer 常溫保存
R-,'-聯-2-萘酚 250mL EDTA Solution,0.5M,pH7.4 常溫保存
4-氨基-3-基甲酯 250mL EDTA Solution,0.5M,pH8.0 常溫保存
3-氨基-4-基甲酯 250mL EDTA Solution,4%,pH7.4 常溫保存
2-氟-5-硝基-5-基啶 250mL EDTA Solution,7%,pH7.0 常溫保存
鈰 50mL EGTA Solution,0.5M,pH7.4 常溫保存
3-羥基氮雜環丁烷鹽鹽 50mL EGTA Solution,0.5M,pH8.0 常溫保存
對基肉桂 50mL EGTA Solution,M,pH7.4 常溫保存
2-苯乙 50mL EGTA Solution,M,pH8.0 常溫保存
鄰溴苯乙 250mL Elution Buffer 常溫保存
巴豆酯 250mL Elution Buffer,pH8.0 常溫保存
4,6-二氯靛紅 0mL Ethidium Bromide Solution,0mg/mL 常溫保存
間苯二甲單甲酯 250mL Factor Xa Protease Digestion Buffer 常溫保存
3-苯甲 250mL FCS Blocking Buffer in PBS 常溫保存
3-氯苯乙 50mL Ferrous Sulfate Solution,0.5M 常溫保存
CDK-2(Cyclin-dependent kinase 2) 人周期素依賴性激酶2 CAS: 5965-3-9 規格: 200mg
CDK-(Cyclin-dependent kinase ) 人周期素依賴性激酶 CAS: 65-55-8 規格: 50mg
AMPK(Phosphorylated adenosine monophosphate activated protein kinase) 人磷化腺苷活化蛋白激酶 CAS: 690-39-2 規格: 500mg
LDH(Lactate Dehydrogenase) 人乳脫氫酶 CAS: 5490-27-7 規格: 200mg
ADAM9(A Disintegrin And Metalloprotease 9) 人解整合素樣金屬蛋白酶9 CAS: 67-96-9 規格: 30mg×4amplues
BACE2(beta-site APP-cleaving enzyme 2) 人β位淀粉樣前體蛋白裂解酶2 CAS: 96-26-4 規格: 250mg
UPP(uridine phosphorylase ) 人核苷磷化酶 CAS: 3736-8-0 規格: 200mg
ADH(alcohol dehydrogenase) 人乙醇脫氫酶 CAS: 205003 規格: 200mg
RND(Rho family GTPase ) 人Rho家族GTP酶 CAS: 規格: 25mg
RIPK2(receptor TNFRSF-interacting serine-threonine kinase 2) 人受體TNFRSF結合絲氨蘇氨激酶2 CAS: 523-87-5 規格: 200mg
PLSCR(phospholipid scramblase ) 人磷脂爬行酶 CAS: 2773-92-4 規格: 2g
HMGCS(3-hydroxy-3-methylglutaryl-Coenzyme A synthase ) 人3-羥基-3-甲基戊二酰合酶 CAS: 67-68-5 規格: 3g
EAR2(eosinophil-associated ribonuclease A family member 2) 人嗜性白血球相關之RNA水解酵素家族成員2 CAS: 38562-0-5 規格: 50mg
EAR3(eosinophil-associated ribonuclease A family member 3) 人嗜性白血球相關之RNA水解酵素家族成員3 CAS: 363-24-6 規格: 50mg
EAR2(eosinophil-associated ribonuclease A family member 2) 人嗜性白血球相關之RNA水解酵素家族成員2 CAS: 3-53-3 規格: 50mg
特點:
. EB病毒(EBV)核酸檢測試劑盒即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡單,定量準確快速。
2. 引物經過優化,特異性強。預期的 PCR 產物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照,便于分析試驗結果。
用途:
. 方便,用戶只需準備模板和引物既可以進行PCR 實驗。
2. 快捷,操作步驟已經限度地簡化,能減少污染,降低實驗誤差。
3. 本產品A 型含電泳染料,PCR 反應液可直接上樣電泳,進一步簡化了操作。
4. 由于各成分的濃度和比例都經過精心優化,反應的靈敏度高,特異性強。能擴增各種常見的DNA 樣品。
5. 產物可直接用于T 載體克隆,不需要額外的加A 反應。
使用及效果:將本產品5 μL 與用戶自備的模板,引物和水共5 μL 混合后,直接進行PCR反(PCR 參數由用戶自己確定),反應結束后直接取0 μL 電泳檢查擴增結果。