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性能指標(biāo):點(diǎn)擊了解更多熒光-PCR法。
.試劑盒檢測(cè)特異性為00%
2. 檢測(cè)試劑盒重現(xiàn)性為00%
3. 靈敏度可達(dá)到03/ml
4. 有效期為6個(gè)月?產(chǎn)品名稱(chēng):山羊CYTB基因核酸檢測(cè)試劑盒
規(guī)格:48T/盒
類(lèi)別:熒光-PCR法
運(yùn)輸:低溫、避光、快遞免費(fèi)送貨上門(mén)。
用途:生化實(shí)驗(yàn),合成實(shí)驗(yàn)等試驗(yàn)。
運(yùn)輸及保存:低溫運(yùn)輸,-20℃保存, 保存期限為 6 個(gè)月。
自備試劑:樣品 RNA。
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使用方法:
一、樣品 RNA 的制備
、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意:可以選用本公司的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二:RT(逆轉(zhuǎn)錄)反應(yīng)合成 cDNA
. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系(20 μL 體系)
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴(yán)格按順序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),
反應(yīng)終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應(yīng)。
5. 70℃保溫 0 分鐘以終止反應(yīng),然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用,丌需要純化。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 5-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至0kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.~umol或0~00pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。?5-溴煙乙酯 25mL Laemmli’s Buffer with Pyronin Y (non reducing,4X) 常溫保存
L-苯氨醇 25mL Laemmli’s Buffer with Pyronin Y (reducing,4X) 常溫保存
2,4,5-三氟硝苯 25mL LDS-Sample Buffer (non-reducing,4X) 常溫保存
4-溴-2-氟 25mL LDS-Sample Buffer (reducing,4X) 常溫保存
4-氟-3-硝 5mg Leucine Solution,0.3% 常溫保存
2-溴丙 50mL Lithium Chloride Solution,M 常溫保存
6-溴-2-啶羧 00mL Lithium Chloride Solution,200mM 常溫保存
2-基-5-硝基啶 500mL Locke’s Solution 常溫保存
L-扁桃酯 25mL Luminol and Oxidizing Solutions 常溫保存
吲哚-4-羧 500mL Lysis Buffer 常溫保存
右旋樟腦-0-酰 250m Lysis Buffer with Triton 常溫保存
Boc-O-芐基-L-酪氨 500mL Lysis Buffer,pH8.0 常溫保存
L-哌啶甲鹽鹽 250ML MABT Washing Solution,5X 常溫保存
L-脯氨酯鹽鹽 500mL Mac Ewen Solution 常溫保存
2-氯-3-氟苯胺 50mL Magnesium Acetate Solution,M 常溫保存
山羊CYTB基因核酸檢測(cè)試劑盒NAG(N-acetyl- Beta-D-glucosaminidase) 人N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶 CAS: 4465-65-0 規(guī)格: 50mg
PAL(L-Phenylalanine ammonla-lyase) 人L苯丙氨解氨酶 CAS: 989-5-5 規(guī)格: 20mg
5-NT(5-Nucleotidase) 人5核苷酶 CAS: 50468-56-9 規(guī)格: 200mg
,3- BetaD-Glu(,3- BetaD glucosidase) 人,3-βD葡葡糖苷酶 CAS: 5-42-3 規(guī)格: 200mg
CK(Creatine Kinase) 人肌激酶 CAS: 2333-80-6 規(guī)格: 200mg
TR(targeted ribonuclease) 人靶向核糖核酶 CAS: 規(guī)格: 300mg
PKC(protein kinase C) 人蛋白激酶C CAS: 474-86-2 規(guī)格: 25mg
ALD(Aldolase) 人縮酶 CAS: 50-4-6 規(guī)格: 30mg×5ampules
L-LDH(L-Lactate Dehydrogenase) 人L-乳脫氫酶 CAS: 8067-24- 規(guī)格: 300mg
ASM(acid sphingomyelinase) 人性神經(jīng)鞘磷脂酶 CAS: 29-5- 規(guī)格: 00mg
ALOX-5(arachidonate 5-lipoxygenase) 人花生四烯5脂加氧酶 CAS: 57-87-4 規(guī)格: 50mg
5-LO/LOX(5-lipoxygenase) 人5脂加氧酶 CAS: 379-79-3 規(guī)格: 50mg
AC-(adenylyl cyclase ) 人腺苷環(huán)化酶 CAS: 639-8-6 規(guī)格: 00mg
sAC(Soluble Adenylate Cyclase) 人可溶性腺苷環(huán)化酶 CAS: 89-65-6 規(guī)格: 50mg
ODC(Ornithine decarboxylase) 人鳥(niǎo)氨脫羧酶 CAS: 49-32-6 規(guī)格: 200mg
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)*,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
企業(yè)信息
ENTERPRISE INFORMATION上海谷研實(shí)業(yè)有限公司
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