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產品名稱 | 大鼠皮層神經元細胞 | 組織來源 | 腦組織 |
規格 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | 包裝 | T25培養瓶 |
貨號 | GOY-01X1025 | 細胞形態 | 神經元細胞樣 |
大鼠皮層神經元分離自腦皮層組織；皮層神經元細胞是構成中樞神經系統結構和功能的基本單位。神經元是具有長突觸(軸突)的細胞，它由細胞體和細胞突起構成。在長的軸突上套有一層鞘，組成神經纖維，它的末端的細小分支叫做神經末梢。細胞體位于腦、脊髓和神經節中，細胞突起可延伸至全身各器官和組織中。細胞體是細胞含核的部分，其形狀大小有很大差別，直徑約4-120微米。核大而圓，位于細胞中央，染色質少，核仁明顯。細胞質內有斑塊狀的核外染色質，還有許多神經元纖維。細胞突起是由細胞體延伸出來的細長部分，又可分為樹突和軸突。每個神經元可以有一或多個樹突，可以接受刺激并將興奮傳入細胞體。每個神經元只有一個軸突，可以把興奮從胞體傳送到另一個神經元或其他組織，如肌肉或腺體。皮質神經元是大腦皮質的主要組成細胞之一，是大腦進行功能活動調節的基本單位，參與動物多種中樞神經系統疾病的病理過程。通過形態學觀察顯示神經元從貼壁、伸出突起開始；突起逐漸增多，而后突起進一步增多并逐漸成網，同時細胞胞體增大，周邊光暈明顯。10-12d細胞最為豐滿，隨后神經元開始裂解，突起逐漸減少，細胞已退化變性，輪廓模糊，光暈消失，細胞變形。
方法簡介：
公司實驗室分離的大鼠皮層神經元采用yi蛋白酶消化法、神經元專用培養基培養篩選結合化學試劑抑制法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測：
公司實驗室分離的大鼠皮層神經元經β-Tubulin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
包被條件 PLL（0.1mg/ml）
培養基 含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態 神經元細胞樣
傳代特性 屬于終末分化細胞；屬于不增殖細胞群
消化液 0.25%yi蛋白酶
培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
準備工作
1. 實驗器材準備：準備無菌的培養皿、培養瓶、移液管、離心管、手術器械等，并進行高壓滅菌或其他合適的消毒處理。
2. 試劑準備：配制或購買合適的培養基、消化酶（如、膠原酶等）、胎牛血清、雙抗等試劑，確保其無菌且在有效期內。
3. 實驗動物或組織來源準備：根據實驗需求，選擇合適的動物并進行相應的麻醉或處死，獲取所需組織；或從已有的組織樣本庫中獲取組織。
取材與處理
1. 取材：在無菌條件下，迅速取出目標組織，盡量減少對組織的損傷，并去除多余的脂肪、結締組織等非目的組織。
2. 清洗：將取出的組織用預冷的無菌PBS沖洗數次，以去除血液和雜質。
3. 剪切：將組織剪成約1 - 2mm3的小塊，以便后續消化。
細胞分離
1. 消化：將剪碎的組織塊放入含有適量消化酶的離心管中，在37℃恒溫搖床或培養箱中消化一段時間。期間可輕輕搖晃離心管，使消化更均勻。
2. 終止消化：當組織塊大部分被消化成單細胞懸液或小細胞團時，加入含血清的培養基終止消化。
3. 過濾與離心：用細胞篩過濾細胞懸液，去除未消化的組織碎片，然后將濾液以適當的轉速離心，收集細胞沉淀。
細胞觀察與檢測
1. 日常觀察：每天用倒置顯微鏡觀察細胞的形態、生長狀態、密度等，記錄細胞的變化情況，如發現細胞污染或異常，及時采取相應措施。
2. 細胞計數與活力檢測：在需要時，可采用臺盼藍染色等方法對細胞進行計數和活力檢測，以了解細胞的生長情況和健康狀態。
小鼠雜交瘤細胞株；4-F10 | 人正常肝細胞苯并芘轉化細胞系；HL-7702BaPT |
一種產生抗羅非魚無乳鏈球菌的單克隆抗體的雜交瘤細胞株；3A9 | SO2水溶液 |
曲妥珠（赫塞汀）耐藥的人乳腺癌細胞；BT-474/HR | Weigert碘液(1%) |
人肝癌細胞株；Huh-7/M8 | 亞鐵化鉀溶液(0.1mol/L) |
小鼠雜交瘤細胞株；2B11 | 硫亞鐵溶液(1%) |
小鼠雜交瘤細胞株；PP65 | 蔗糖-PFA溶液(30%) |
人肝癌細胞株；Huh-7/F24 | 蔗糖-PFA溶液(20%) |
人肺巨細胞癌細胞；PLA-801D | 蔗糖-PFA溶液(10%) |
小鼠雜交瘤細胞株；FlounderIgM-H | 氨基黑10B染色液(0.1%) |
小鼠雜交瘤細胞株；IE1 | 鉛鹽染色試劑盒(玫棕法) |
人白血病HL-60細胞耐藥細胞株；HL-60/RS | 鐵水溶液(0.1mol/L) |
小鼠雜交瘤細胞株；1E4 | 性品紅胺飽和溶液 |
小鼠雜交瘤細胞株；4E3 | 大鼠皮層神經元細胞氨溶液(0.1%) |
小鼠雜交瘤細胞株；11B10 | 硫鋁水溶液(2%) |
二甲雙酮 | Thomas磷鉬蘇木染色試劑盒 |
一、取材與分離
1. 快速操作
- 組織取材后需立即處理，避免長時間暴露于室溫或非營養環境。
- 使用無菌 PBS 或生理鹽水沖洗組織，去除血液、雜質。
2. 消化酶選擇
- 根據組織類型選擇消化酶，避免過度消化導致細胞損傷。
- 消化時間需嚴格控制（通常 10-30 分鐘），可通過顯微鏡觀察細胞解離狀態。
二、培養條件優化
1. 培養基選擇
- 使用含血清或特定生長因子的培養基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分細胞需添加胰島素、EGF 等。
- 避免頻繁更換培養基品牌或批次，減少細胞適應壓力。
2. 貼壁與傳代
- 原代細胞貼壁能力較弱，可能需要包被培養皿（如膠原蛋白、多聚賴氨酸）。
- 傳代時密度建議控制在 70%-80%，過度匯合會導致接觸抑制和分化。
三、污染控制
1. 無菌操作
- 全程在超凈臺操作，使用一次性耗材，避免交叉污染。
- 培養基中可添加雙抗，但長期使用可能影響細胞活性。
2. 支原體檢測
- 定期檢測支原體污染（如 PCR 法），污染后需及時丟棄細胞。
四、狀態監控
1. 日常觀察
- 每天檢查細胞形態、密度及培養基顏色，及時更換培養基（通常每 2-3 天換液一次）。
- 異常形態（如細胞變圓、碎片增多）可能提示污染或營養不足。
2. 傳代與凍存
- 原代細胞分裂次數有限（一般 5-10 代），需及時凍存早期代次細胞。
- 凍存液建議使用 DMSO+血清（或專用凍存培養基），梯度降溫后液氮保存。
