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產品名稱 | 大鼠椎間盤纖維環細胞 | 組織來源 | 椎間盤組織 |
規格 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | 包裝 | T25培養瓶 |
貨號 | GOY-01X1278 | 細胞形態 | 梭形、多角形 |
大鼠椎間盤纖維環分離自椎間盤組織；椎間盤是位于脊柱兩椎體之間，由軟骨板、纖維環、髓核組成的一個密封體。上下有軟骨板，是透明軟骨復蓋于椎體上，下面骺環中間的骨面。上下的軟骨板與纖維環一起將髓核密封起來。纖維環由膠原纖維束的纖維軟骨構成，位于髓核的四周。纖維環的纖維束相互斜行交叉重疊，使纖維環成為堅實的組織，能承受較大的彎曲和扭轉負荷。纖維環的前側及兩側較厚，而后側較薄。纖維環的前部有強大的前縱韌帶，后側的后縱韌帶較窄、較薄。纖維環細胞密度為9000個細胞/mm3，其外層的細胞呈梭型，主要屬于纖維細胞，內層細胞呈圓形，主要屬于軟骨細胞。在培養的情況下，用透射電鏡觀察則有許多共同的超微結構表現，它們的核較圓，核仁較明顯。細胞質內可見大量的附有核糖體顆粒的粗面內質網和滑面內質網。細胞質內線粒體多，為橢圓形，有的可看到雙層單位膜，由單位膜包繞初級深酶體和次級深酶體。細胞質內有一系列的扁平囊及小泡主成的高爾基復合體和分泌顆粒，纖維環細胞合成分泌蛋白多糖及膠原纖維的能力很旺盛，保證纖維環生理代謝活動所需的構造物質的供給。一但這種供給減少，纖維環的生物性能就會減弱，椎間盤開始退變。
方法簡介：
公司實驗室分離的大鼠椎間盤纖維環采用膠原酶-中性dan白酶聯合消化法并結合軟骨細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測：
公司實驗室分離的大鼠椎間盤纖維環經Ⅰ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態 梭形、多角形
傳代特性 可傳5代左右；3代以內狀態
消化液 0.25%yi蛋白酶
培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
準備工作
1. 實驗器材準備：準備無菌的培養皿、培養瓶、移液管、離心管、手術器械等，并進行高壓滅菌或其他合適的消毒處理。
2. 試劑準備：配制或購買合適的培養基、消化酶（如、膠原酶等）、胎牛血清、雙抗等試劑，確保其無菌且在有效期內。
3. 實驗動物或組織來源準備：根據實驗需求，選擇合適的動物并進行相應的麻醉或處死，獲取所需組織；或從已有的組織樣本庫中獲取組織。
取材與處理
1. 取材：在無菌條件下，迅速取出目標組織，盡量減少對組織的損傷，并去除多余的脂肪、結締組織等非目的組織。
2. 清洗：將取出的組織用預冷的無菌PBS沖洗數次，以去除血液和雜質。
3. 剪切：將組織剪成約1 - 2mm3的小塊，以便后續消化。
細胞分離
1. 消化：將剪碎的組織塊放入含有適量消化酶的離心管中，在37℃恒溫搖床或培養箱中消化一段時間。期間可輕輕搖晃離心管，使消化更均勻。
2. 終止消化：當組織塊大部分被消化成單細胞懸液或小細胞團時，加入含血清的培養基終止消化。
3. 過濾與離心：用細胞篩過濾細胞懸液，去除未消化的組織碎片，然后將濾液以適當的轉速離心，收集細胞沉淀。
細胞觀察與檢測
1. 日常觀察：每天用倒置顯微鏡觀察細胞的形態、生長狀態、密度等，記錄細胞的變化情況，如發現細胞污染或異常，及時采取相應措施。
2. 細胞計數與活力檢測：在需要時，可采用臺盼藍染色等方法對細胞進行計數和活力檢測，以了解細胞的生長情況和健康狀態。
人子宮頸內膜細胞 | 人非小細胞肺腺癌細胞 |
人脈絡從上皮細胞 | 吲哚美法呢酯 |
小鼠白血病細胞 | 異去甲蟛蜞菊內酯 |
人視網膜色上皮細胞 | Isovalerylcarnitine |
人結腸上皮細胞 | Isopropamide Iodide |
人淋巴母細胞瘤細胞 | 異惡唑草酮 |
人正常胃黏膜上皮細胞 | 伊索昔康 |
GES-1人胃黏膜上皮細胞 | Ispronicline |
小鼠高轉移性乳腺癌細胞 | Imatinib impurities3 |
大鼠結締組織成纖維細胞 | Ifebemtinib |
人大細胞肺癌細胞 | L-Hyoscyamine sulfate |
上皮樣細胞生長的單層細胞 | 7-Hydroxycarbostyril |
小鼠多巴能神經細胞 | 大鼠椎間盤纖維環細胞5-Hydroxyuridine |
大鼠睪丸間質細胞 | 5-alpha-Hydroxy-Laxogenin |
250mL 八角儲存瓶，31.4mm HDPE螺旋蓋，PET材質，滅菌 | 3-羥基-1-(4-羥基苯基)丙烷-1-酮 |
一、取材與分離
1. 快速操作
- 組織取材后需立即處理，避免長時間暴露于室溫或非營養環境。
- 使用無菌 PBS 或生理鹽水沖洗組織，去除血液、雜質。
2. 消化酶選擇
- 根據組織類型選擇消化酶，避免過度消化導致細胞損傷。
- 消化時間需嚴格控制（通常 10-30 分鐘），可通過顯微鏡觀察細胞解離狀態。
二、培養條件優化
1. 培養基選擇
- 使用含血清或特定生長因子的培養基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分細胞需添加胰島素、EGF 等。
- 避免頻繁更換培養基品牌或批次，減少細胞適應壓力。
2. 貼壁與傳代
- 原代細胞貼壁能力較弱，可能需要包被培養皿（如膠原蛋白、多聚賴氨酸）。
- 傳代時密度建議控制在 70%-80%，過度匯合會導致接觸抑制和分化。
三、污染控制
1. 無菌操作
- 全程在超凈臺操作，使用一次性耗材，避免交叉污染。
- 培養基中可添加雙抗，但長期使用可能影響細胞活性。
2. 支原體檢測
- 定期檢測支原體污染（如 PCR 法），污染后需及時丟棄細胞。
四、狀態監控
1. 日常觀察
- 每天檢查細胞形態、密度及培養基顏色，及時更換培養基（通常每 2-3 天換液一次）。
- 異常形態（如細胞變圓、碎片增多）可能提示污染或營養不足。
2. 傳代與凍存
- 原代細胞分裂次數有限（一般 5-10 代），需及時凍存早期代次細胞。
- 凍存液建議使用 DMSO+血清（或專用凍存培養基），梯度降溫后液氮保存。
