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產品名稱 | 小鼠外周血中性粒細胞 | 組織來源 | 外周血 |
規格 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | 包裝 | T25培養瓶 |
貨號 | GOY-01X1146 | 細胞形態 | 圓形 |
小鼠外周血中性粒分離自外周血；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細胞，我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞，在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念。白細胞是一類無色、球形、有核的血細胞。白細胞不是一個均一的細胞群，根據其形態、功能和來源部位可以分為三大類：粒細胞、單核細胞和淋巴細胞，其中粒細胞又可根據胞質中顆粒的染色性質不同，分為中性粒細胞、嗜酸粒細胞和嗜堿粒細胞三種。中性粒細胞是在瑞氏（Wright）染色血涂片中，胞質呈無色或極淺的淡紅色，有許多彌散分布的細小的（0.2～0.4微米）淺紅或淺紫色的顆粒。細胞核呈桿狀或2～5分葉狀，葉與葉間有細絲相連。中性粒細胞具趨化作用、吞噬作用和殺菌作用。中性粒細胞來源于骨髓，具有分葉形或桿狀的核，胞漿內含有大量既不嗜堿也不嗜酸的中性細顆粒。這些顆粒多是溶酶體，內含髓過氧化酶、、堿性磷酸酶和酸性水解酶等豐富的酶類，與細胞的吞噬和消化功能有關。中性粒細胞在血液的非特異性免疫中起著十分重要的作用，它處于機體抵御微生物病原體，特別是在化膿性細菌入侵的線，具有很強的吞噬活性，可吞噬細菌、衰老的紅細胞、抗原一抗體復合物和壞死的細胞等。中性粒細胞內含有大量溶酶體酶，因此能將吞噬入細胞內的細菌和組織碎片分解。當中性粒細胞吞噬數十個細菌后，自身發生解體，所釋出的各種溶酶體酶類能溶解周圍組織而形成膿液。中性粒細胞是人體內壽命最短的細胞，一般體外培養12-24h內活性穩定，48h活性下降，96h基本死亡。
方法簡介：
公司實驗室分離的小鼠外周血中性粒采用取外周血、通過密度梯度離心法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測：
公司實驗室分離的小鼠外周血中性粒經瑞氏染色法，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 懸浮
細胞形態 圓形
傳代特性 不增殖；不傳代
消化液 0.25%yi蛋白酶
培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
準備工作
1. 實驗器材準備：準備無菌的培養皿、培養瓶、移液管、離心管、手術器械等，并進行高壓滅菌或其他合適的消毒處理。
2. 試劑準備：配制或購買合適的培養基、消化酶（如、膠原酶等）、胎牛血清、雙抗等試劑，確保其無菌且在有效期內。
3. 實驗動物或組織來源準備：根據實驗需求，選擇合適的動物并進行相應的麻醉或處死，獲取所需組織；或從已有的組織樣本庫中獲取組織。
取材與處理
1. 取材：在無菌條件下，迅速取出目標組織，盡量減少對組織的損傷，并去除多余的脂肪、結締組織等非目的組織。
2. 清洗：將取出的組織用預冷的無菌PBS沖洗數次，以去除血液和雜質。
3. 剪切：將組織剪成約1 - 2mm3的小塊，以便后續消化。
細胞分離
1. 消化：將剪碎的組織塊放入含有適量消化酶的離心管中，在37℃恒溫搖床或培養箱中消化一段時間。期間可輕輕搖晃離心管，使消化更均勻。
2. 終止消化：當組織塊大部分被消化成單細胞懸液或小細胞團時，加入含血清的培養基終止消化。
3. 過濾與離心：用細胞篩過濾細胞懸液，去除未消化的組織碎片，然后將濾液以適當的轉速離心，收集細胞沉淀。
細胞觀察與檢測
1. 日常觀察：每天用倒置顯微鏡觀察細胞的形態、生長狀態、密度等，記錄細胞的變化情況，如發現細胞污染或異常，及時采取相應措施。
2. 細胞計數與活力檢測：在需要時，可采用臺盼藍染色等方法對細胞進行計數和活力檢測，以了解細胞的生長情況和健康狀態。
小鼠雜交瘤細胞；D11E8A1H9 | 大鼠源 |
大鼠肝細胞瘤；H4-II-E-C3 | 卡那霉（5ug）藥敏實驗紙片 |
大鼠氣管上皮細胞；RTE | 吡利霉藥敏實驗紙片 |
大鼠肝細胞；IAR20 | 桿菌（100ug）藥敏實驗紙片 |
大鼠小腸隱窩上皮細胞；IEC-6 | 吡哌藥敏實驗紙片 |
大鼠垂體瘤細胞；MMQ | 桿菌（50ug）藥敏實驗紙片 |
大鼠垂體瘤細胞；GH3 | 哌拉西（30ug）藥敏實驗紙片 |
兔結腸平滑肌細胞 | 哌拉西/他唑巴藥敏實驗紙片（36ug） |
大鼠肝細胞；BRL | 制霉菌藥敏實驗紙片 |
大鼠腎系膜細胞；RMC | 利福（30ug）藥敏實驗紙片 |
正常大鼠腎細胞（EGF受體陽性）；NRK49F | 利奈唑（10ug）藥敏實驗紙片 |
大鼠胰島β細胞瘤細胞；RIN-m5F | 克林霉（10ug）藥敏實驗紙片 |
大鼠胰島細胞瘤細胞；INS-1 | 小鼠外周血中性粒細胞克拉霉（5ug）藥敏實驗紙片 |
Walker氏癌肉瘤256瘤株；W256 | 克拉霉（2ug）藥敏實驗紙片 |
維博利單抗 | 克拉霉（15ug）藥敏實驗紙片 |
一、取材與分離
1. 快速操作
- 組織取材后需立即處理，避免長時間暴露于室溫或非營養環境。
- 使用無菌 PBS 或生理鹽水沖洗組織，去除血液、雜質。
2. 消化酶選擇
- 根據組織類型選擇消化酶，避免過度消化導致細胞損傷。
- 消化時間需嚴格控制（通常 10-30 分鐘），可通過顯微鏡觀察細胞解離狀態。
二、培養條件優化
1. 培養基選擇
- 使用含血清或特定生長因子的培養基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分細胞需添加胰島素、EGF 等。
- 避免頻繁更換培養基品牌或批次，減少細胞適應壓力。
2. 貼壁與傳代
- 原代細胞貼壁能力較弱，可能需要包被培養皿（如膠原蛋白、多聚賴氨酸）。
- 傳代時密度建議控制在 70%-80%，過度匯合會導致接觸抑制和分化。
三、污染控制
1. 無菌操作
- 全程在超凈臺操作，使用一次性耗材，避免交叉污染。
- 培養基中可添加雙抗，但長期使用可能影響細胞活性。
2. 支原體檢測
- 定期檢測支原體污染（如 PCR 法），污染后需及時丟棄細胞。
四、狀態監控
1. 日常觀察
- 每天檢查細胞形態、密度及培養基顏色，及時更換培養基（通常每 2-3 天換液一次）。
- 異常形態（如細胞變圓、碎片增多）可能提示污染或營養不足。
2. 傳代與凍存
- 原代細胞分裂次數有限（一般 5-10 代），需及時凍存早期代次細胞。
- 凍存液建議使用 DMSO+血清（或專用凍存培養基），梯度降溫后液氮保存。
