使用方法:
一、樣品 RNA 的制備
、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意:可以選用本公司的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二:RT(逆轉錄)反應合成 cDNA
. 按下表配制 RT 反應體系(20 μL 體系)
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴格按順序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),
反應終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應。
5. 70℃保溫 0 分鐘以終止反應,然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用,丌需要純化。?產品名稱:沙雷菌通用PCR檢測試劑盒供應商
英文名稱:Serratia spp.PCR
規格:詳見說明書
類別:PCR檢測試劑盒
運輸:低溫、避光、快遞免費送貨上門。
用途:生化實驗,合成實驗等試驗。
運輸及保存:低溫運輸,-20℃保存, 保存期限為 6 個月。
自備試劑:樣品 RNA。
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性能指標:點擊了解更多PCR檢測試劑盒。
.試劑盒檢測特異性為00%
2. 檢測試劑盒重現性為00%
3. 靈敏度可達到03/ml
4. 有效期為6個月
注意事項:
①加入試劑的順序應*,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 5-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至0kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.~umol或0~00pmol,以低引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。?pHY300英文名(EN):4-Hydroxyphenylacetamide,95%CAS No.:794-82-0規格(SP):25G類別(Key):通用試劑
pHY43英文名(EN):N-Methylformamide,98%CAS No.:23-39-7規格(SP):00ML類別(Key):通用試劑
pIC英文名(EN):Poly(acrylamide-co-diallyldimethylammo...CAS No.:26590-05-6規格(SP):00ML類別(Key):通用試劑
pIEXBac-英文名(EN):Ethionamide,98%CAS No.:536-33-4規格(SP):5G類別(Key):通用試劑
pIE-neo英文名(EN):2-Thiopheneethylamine,96%CAS No.:30433-9-規格(SP):G類別(Key):通用試劑
pIEXBac-c-EGFP-英文名(EN):3-Chloro-2-methylaniline,99%CAS No.:87-60-5規格(SP):00G類別(Key):通用試劑
pIEXBac-c-EGFP-2英文名(EN):2,6-Difluorobenzamide,97%CAS No.:8063-03-規格(SP):25G類別(Key):通用試劑
pIEXBac-c-EGFP-3英文名(EN):Tectoridin (≥98%,HPLC)CAS No.:42553-65-規格(SP):20MG類別(Key):標準品
pIEXBac-c-EGFP-4英文名(EN):Crocin I (≥98%,HPLC)CAS No.:Null規格(SP):20MG類別(Key):標準品
PiggyBac 3’LTR英文名(EN):Crocin II (≥98%,HPLC)CAS No.:55750-84-0規格(SP):20MG類別(Key):標準品
PiggyBac 5’LTR英文名(EN):Morin hydrate (≥98%,HPLC)CAS No.:480-6-0規格(SP):20MG類別(Key):標準品
PiggyBac Dual Promoter英文名(EN):D-(-)-Quinic acid (≥98%,HPLC)CAS No.:77-95-2規格(SP):20MG類別(Key):標準品
pIJ8860英文名(EN):catalpol (≥98%,HPLC)CAS No.:245-24-9規格(SP):20MG類別(Key):標準品
pADEasy-/BJ583英文名(EN):Phlorizin (≥98%,HPLC)CAS No.:60-8-規格(SP):20MG類別(Key):標準品
pIK英文名(EN):Ecdysterone (≥98%,HPLC)CAS No.:5289-74-7規格(SP):20MG類別(Key):標準品
pIL253英文名(EN):6-gingerol (≥98%,HPLC)CAS No.:2353-4-6規格(SP):20MG類別(Key):標準品
pIND英文名(EN):Ligustilide (≥98%,HPLC)CAS No.:443-0-0規格(SP):20MG類別(Key):標準品
PINDCSPD英文名(EN):-Deoxynojirimycin (≥98%,HPLC)CAS No.:930-96-2規格(SP):20MG類別(Key):標準品
沙雷菌通用PCR檢測試劑盒供應商藥品,藥及其代謝物同位素標記標準品列表250ml國產
一級目錄:色譜標準品和試劑二級目錄:臨床藥品和代謝物標準品0×LGibco
制冷劑,氟利昂等標準品0×LGibco
GPC標定標準品0×LGibco
EPA508 6組分有機氯藥混標0×LGibco