ELISA試劑盒用純化的豬（Cortisol）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入豬（Cortisol），再與HRP標記的豬（Cortisol）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的豬（Cortisol）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中（Cortisol）濃度。

　　ELISA試劑盒的注意事項：

　　1．ELISA試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡5-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

　　2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

　　3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，使用排槍加樣。

　　4．請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。

　　5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　ELISA試劑盒的基本原理：

　　1.使抗原或抗體結合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。

　　2.使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測定時，把受檢標本(測定其中的抗體或抗原)和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其他物質分開，結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化變為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據顏色反應的深淺刊物定性或定量分析。