殘留elisa試劑盒操作流程如下:
()待測樣品孔中每孔加入待測樣品00μl,每種樣品設3個平行孔;設兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液00μl;另設一個空白對照孔,加入純細胞裂解液00μl。
(2)酶標板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內反應液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 00μl。
(8)酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(0)每孔加TMB顯色液 00μl,輕輕混勻0s,置37℃暗處反應5-20min。
()每孔加00μl 2mol/L H2SO4終止反應。
(2)分別測450nm 吸光值W和630nm吸光值W2,zui終測得的OD值為兩者之差(W-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(3)數據處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.為陽性判定標準。