. 進口ELISA試劑盒收取0~50 g 新鮮的植物組織。
2. 植物組織用冷的無菌水洗滌、吸干,放人液氮中凍結,用研缽和研杵研成細粉。
3. 將凍結的細粉放入250 ml 的離心瓶中,立即加入抽提緩沖液約每克植物5~0 ml,輕輕攪拌混勻。
4. 加入十二烷基肌氨酸鈉使終濃度達%,于溫育~2 h。
5. 用JA-4轉子4℃,5 500 g 離心0min 保留上清,必要時重復此歩驟以除去殘渣。
6. 加人0.6體積異丙醇,混合,如果看不見沉淀,于-20℃放置30 min,用JA-4轉子4℃,7 500 g 離心5 min,棄上清。
7. 沉淀用9 ml TE緩沖液重懸,加入9.7 g 固體氯化銫,混勻,冰上放置30 min,用JA-4轉子,7 500 g 離心0 min,保留上清。
8. 加入0.5 ml 0 mg/ml 的溴化乙錠,冰上放置30 min,4℃ 7500 g 離心0min.
9. 將上清轉入兩個5 ml 的快封超離心管中,并封口。
0. 用VTi80轉子20℃ 525 000 g 離心4 h,或20℃,300 000 g 離心,用5號針頭和注射器收集帶。
. 用氯化艷飽和的異丙醇重復抽提DNA以除去溴化乙錠。
2. 加入2體積水和6體積00%乙醇,混勻,-20℃放置 h,用JA-20或JA-2轉子4℃,7500 g 離心0 min。
3. 沉淀用TE緩沖液重懸,加入/0體積的3 mol/l 乙酸鈉和2體積的00%乙酵重懸,重復離心。
4. 沉淀晾干后用TE緩沖液重懸進口ELISA試劑盒。
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