重組體克隆的篩選與鑒定

    由體外重組產(chǎn)生的DNA分子，通過轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)染、轉(zhuǎn)導等適當途徑引入宿主會得到大量的重組體細胞或噬菌體。然而在這些眾多的重組體中，會有多種類型的DNA分子，其中包括：不帶任何外源DNA插入片段，僅是由線性載體分子自身連接形成的環(huán)狀DNA分子；由一個載體分子和一個或數(shù)個外源DNA片段構(gòu)成的重組體DNA分子；單純由數(shù)個外源DNA片段彼此連接形成的多聚DNA分子。當然zui后這類多聚DNA分子由于不具備復制起點和復制基因，不能在轉(zhuǎn)化子中存留，zui后被消耗掉成為無用的分子。盡管如此，面對由這種混合的DNA制劑轉(zhuǎn)化而來的大量的克隆群體，需要采用特殊的方法才能篩選出可能含有目的基因的重組體克隆。同時也需要用某種方法檢測從這些克隆中提取的質(zhì)粒或噬菌體DNA，看其是否確實具有一個插入的外源DNA片段。即便在這一問題得到了證實之后，也還不能肯定這些重組載體所含有的外源DNA片段就一定是編碼所研究的目的基因的序列。為解決這一系列的問題，從為數(shù)眾多的轉(zhuǎn)化子克隆中分離出含有目的基因的重組體克隆，需要建立一整套行之有效的特殊方法。

    目前已經(jīng)發(fā)展和應用了一系列構(gòu)思巧妙、可靠性較高的重組體克隆檢測法，包括使用特異性探針的核酸雜交法、免疫化學法、遺傳檢測法和物理檢測法等。細胞

遺傳檢測法

    遺傳檢測法可分為根據(jù)載體表型特征和根據(jù)插入序列的表型特征選擇重組子兩種方法。

根據(jù)載體表型特征選擇重組體分子的直接選擇法

    根據(jù)載體分子所提供的表型特征直接選擇重組體DNA分子的遺傳選擇法是一種十分有效的方法，當它與微生物學技術相配合時便可適用于大量群體的篩選。在基因工程中使用的所有的載體分子都帶有一個可選擇的遺傳標記或表型特征。質(zhì)粒以及柯斯載體具有抗藥性標記或營養(yǎng)標記，而對于噬菌體來說，噬菌斑的形成則是它們的自我選擇特征。根據(jù)載體分子所提供的遺傳特征進行選擇，是獲得重組體DNA分子群體的*的條件之一。正如已經(jīng)敘述過的，這種遺傳選擇法能將重組體的DNA分子同非重組體的親本載體分子區(qū)別開來。抗生素抗性選擇基因插入失活選擇，或者是諸如β-半乳糖苷酶基因一類的顯色反應，便是屬于這種依據(jù)載體編碼的遺傳特性選擇重組體分子的典型方法。細胞