雜交反應(yīng)是指用雜交液孵育組織切片，雜交液中標記的核酸探針在適當(dāng)?shù)臈l件下與組織細胞內(nèi)相應(yīng)的靶核酸互補結(jié)合形成雜交體的過程。雜交液的成分與預(yù)雜交液基本相同，所不同的只是加入標記的核酸探針。ELISA試劑盒

    雜交前的準備只是為雜交成功奠定基礎(chǔ)．要獲得滿意的實驗結(jié)果，在雜交 反應(yīng)的實驗過程中還必須注意以下環(huán)節(jié)。
    雙鏈DNA探針和靶DNA變性

    進行雜交反應(yīng)時．探針和靶核酸必須均是單鏈，兩者方能結(jié)合。如果探針和靶核酸均為雙鏈或二者中有一者是雙鏈。必須通過變性使其變?yōu)閱捂湣Ｒ话阃ㄟ^加熱變性。變性溫度為95C，5～5分鐘。探針和(或)靶核酸一旦變性，則需立即進行雜交反應(yīng)，否則解鏈的核酸又會重新復(fù)性。如果用單鏈探針檢測靶RNA，一般不需要變性。有時單鏈探針較長，可能會在局部形成雙鏈，這時也同樣可通過加熱處理使局部雙鏈解開以利于探針和靶核酸之間的結(jié)合。ELISA試劑盒

    微波爐處理也可使雙鏈DNA探針和靶DNA變性。此法不僅能使雙鏈探針和靶核酸有效地變性，而且還能使雜交信號增加。這可能是由于微波輻射引起基質(zhì)蛋白質(zhì)變性，使靶核酸暴露，也可能是微波輻射對靶核酸構(gòu)型產(chǎn)生直接影響，從而提高雜交效率。ELISA試劑盒